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关于溥畔 PP-DY800 电泳仪电源梳子拔取困难粘胶的问题诊断与平滑脱模方案
灌胶后,在拔出样品梳时感到异常费力,甚至导致梳齿弯曲、断裂,或齿孔内的凝胶被连带撕裂、变形,这会严重影响上样孔的规整性,导致上样量不准、条带扭曲。梳子拔取困难通常是由凝胶聚合过程及梳子本身特性共同导致的。
问题成因的深入探究
拔梳困难的核心是凝胶与梳子齿之间形成了过强的粘附力或机械互锁。具体原因包括:
凝胶聚合问题(主要原因):
聚合速度过快:TEMED(促凝剂)用量过多,或环境温度过高,导致凝胶在梳子齿周围剧烈、快速聚合,产生较大的收缩应力,将梳齿“咬紧”。
胶浓度过高或配方偏硬:高浓度的丙烯酰胺凝胶(如>15%)或配方中交联剂比例相对较高时,凝胶本身硬度大、弹性差,与梳齿的摩擦力增大。
聚合不完全:凝胶局部聚合不良,形成黏稠的未完全交联区域,像胶水一样粘住梳齿。
梳子本身状态与操作问题:
梳齿表面不光滑:梳子使用多次后,齿表面可能出现细微划痕、毛刺,或残留有上次未洗净的旧胶,增加了与新生凝胶的接触面积和粘附点。
拔梳时机不当:凝胶聚合过程分为“凝固”和“老化”阶段。在刚刚凝固(胶体可滑动但已成型)时拔梳最容易。等待时间过长(如过夜),凝胶充分老化收缩,与梳齿结合更紧密;过短,则凝胶未完全凝固,易撕裂。
拔梳方式错误:直接从一端猛地用力竖直向上拔,会导致受力不均,需要克服的瞬间最大静摩擦力极大。
平滑脱模的系统性解决方案
优化灌胶操作:
控制聚合速度:在推荐范围内,适当减少TEMED的用量,或在较低环境温度下(如冷室或空调房)灌胶,让凝胶温和、均匀地聚合,减少内应力。
确保聚合完全:灌胶后静置足够时间(通常20-30分钟以上),可通过观察胶体与顶层水封层之间出现清晰折射线来判断。
规范的梳子处理与拔取技巧:
梳子预处理:灌胶前,确保梳子绝对洁净、干燥。可以用无水乙醇擦拭后晾干。对于新梳子或非常粘的情况,可在梳齿上极薄地涂覆一层防水硅酮润滑剂(如Signacote),或用无水乙醇浸湿的滤纸轻轻擦拭齿面,待乙醇挥发后形成微疏水层。(注意:确保试剂不影响蛋白质样品)。
把握最佳拔梳时机:在凝胶聚合完成后1小时内拔除通常较为理想。如果需放置过夜,应在凝胶刚凝固时(约灌胶后30分钟)先轻轻拔梳一次,让齿孔初步形成,然后在缓冲液中4℃保存。
正确的拔梳手法:
先用双手的拇指和食指捏住梳子两端。
平行于凝胶表面,缓慢、水平地轻轻摇动梳子,先解除一侧的粘附,再解除另一侧,让空气逐渐进入齿孔。
当感觉梳子已松动,再平稳、垂直向上将其拔出。
拔梳时,可在凝胶顶部加入少量电泳缓冲液作为润滑。
应急处理:如果梳子已被卡死,切勿使用暴力。可将整个制胶装置水平浸入盛有电泳缓冲液或去离子水的浅盘中,浸泡10-20分钟,让液体渗入界面,润滑后再尝试缓慢摇动拔出。
通过预防性操作和标准化流程,可以确保每次都能轻松获得齿孔清晰、形状规整的上样孔,为精准上样铺平道路。
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